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本制品是用于LAMP扩增反应的冻干预混试剂，包含了低盐缓冲盐、Mg²⁺、dNTP、Bst4.0 DNA/RNA聚合酶、pH变色染料ROY，使用时只需要加入引物、模板即可进行核酸恒温扩增。Bst4.0 DNA/RNA聚合酶对DNA或RNA模板均可使用该制品进行恒温扩增。

由于LAMP在反应时会产生大量的H⁺，导致反应体系pH下降（通常由pH8.8，下降到7.2以下），因此，低缓冲盐体系条件下，可搭配pH敏感染料ROY实现可视化检测LAMP检测。该制品中包含低浓度Tris（pH8.8）缓冲盐。在搭配pH敏感染料的情况下，可进行变色LAMP扩增。

本制品为冻干品，使用前每瓶用0.5mL ddH2O溶解，溶解后即为2.5×RNA/DNA ROY LAMP Mix，可用于50次25μL反应体系的实验。溶解后剩余的试剂于-20℃保存（14天内有效）、或-80℃保存（3月内有效）。

• 该试剂对影响pH的缓冲盐敏感，因此模板中Tris盐、NaOH等成分对反应有至关重要的影响。在采用核酸纯化的样本检测时，推荐使用ddH2O进行洗脱。
  
• 在使用粗制样本时，建议使用ddH2O保存的样本进行检测。在对粗制样本进行检测时，最佳的粗制样本为拭子样本，拭子样本经ddH2O浸泡后，可以直接使用浸泡液作为模板进行扩增，无需核酸纯化步骤。
  
• 关于DEPC水使用的特殊说明：由于DEPC处理过的ddH2O显示很强的酸性，会直接导致反应体系变为黄色。所以DEPC处理过的H2O必须经NaOH溶液调整pH到8.0～9.0后方可使用。我们推荐直接使用，水机制备的18.2Ω H2O，不影响RNA样本的扩增。
  
• 该试剂一经溶解后，不可再次冻干。

• 配制反应体系
  

  成分	用量
  2.5×RNA/DNA ROY LAMP Mix	10μL
  10×LAMP Primer Mix	2.5μL
  模板DNA/RNA	X μL
  ddH2O	至25μL

  • 10×LAMP Primer Mix的配制，FIP/BIP分别为16μM、LoopF/B分别为4～8μM、F3/B3分别为2μM。引物的稀释液均使用ddH2O（pH8.0～9.0），不能使用含有Tris缓冲盐系统。由于该变色方法对pH敏感，多数情况下引物溶解后成酸性，因此在10×引物中加入终浓度1mM NaOH使引物恢复到中性pH（~8.5），注意NaOH需新鲜配制，可配制成50～100mM浓度使用。
• 盖上管盖，置于65℃进行反应20～30min。
  
• 肉眼观察结果，黄色为阳性，红色为阴性。